A fase móbil é equivalente á fase líquida do sangue, e hai varias cousas ás que prestar atención durante o uso. Entre elas, hai algunhas "trampas" ás que hai que prestar atención.
01. Mide o pH da fase móbil despois de engadir disolvente orgánico
Se mide o pH cun aditivo orgánico, o pH que obtén será diferente que antes de engadir o disolvente orgánico. Non obstante, o máis importante é ser coherentes. Se sempre mide o pH despois de engadir o disolvente orgánico, asegúrate de indicar os teus pasos no método que utilizas para que outros sigan o mesmo método. Este método non é 100% preciso, pero polo menos manterá o método consistente. Isto pode ser máis importante que obter un valor de pH preciso.
02. Non se utilizou ningún buffer
O propósito dun tampón é controlar o pH e evitar que cambie. Moitos outros métodos cambian o pH da fase móbil, o que pode provocar cambios no tempo de retención, na forma do pico e na resposta máxima.
O ácido fórmico, TFA, etc. non son tampones
03. Non usar tampón dentro do intervalo de pH normal
Cada tampón ten un ancho de intervalo de 2 unidades de pH, dentro do cal proporciona a mellor estabilidade do pH. Os tampones fóra desta xanela non proporcionarán unha resistencia efectiva aos cambios de pH. Use un tampón no intervalo correcto ou elixe un que cubra o intervalo de pH que necesita.
04. Engadir tampón á solución orgánica
Mesturar unha solución tampón cunha fase orgánica probablemente fará que o tampón precipite. En moitos casos, aínda que se produciron precipitacións, aínda é difícil de detectar. Lembre sempre engadir a solución orgánica á fase acuosa, o que pode reducir moito a posibilidade de precipitación do tampón.
05. Mestura o gradiente de concentración do 0% cunha bomba
As bombas dispoñibles hoxe en día poden mesturar eficazmente as fases móbiles e a desgasificación en liña, pero non todos os que utilicen o teu método terán unha bomba de alta calidade. Mestura A e B nunha única solución e execútaa ao 100% en liña.
Por exemplo, pódense preparar 950 ml de mestura de partida orgánica mesturando con 50 ml de auga. A vantaxe disto é que pode reducir a variabilidade entre HPLC e reducir a posibilidade de burbullas e precipitacións no sistema. Paga a pena notar que a proporción da mestura da bomba é de 95:5, o que non significa que o tempo de retención premesturado na botella sexa tamén de 95:5.
06. Non usar o ácido modificado (base) correcto para cambiar o tampón
Use só o ácido ou a base que forma o sal tampón que está a usar. Por exemplo, un tampón de fosfato de sodio debe prepararse só con ácido fosfórico ou hidróxido de sodio.
07. Non indicar toda a información sobre o tampón no método, como engadir 5 g defosfato de sodio a 1000 ml de auga.
O tipo de tampón determina o intervalo de pH que se pode tampón. A concentración necesaria determina a forza tampón. 5 gramos de fosfato sódico anhidro e 5 gramos de fosfato monosódico monohidrato teñen diferentes concentracións de tampón.
08. Engadir disolventes orgánicos antes da comprobación
Se o método anterior utilizaba unha solución tampón para a liña de base B e o seu método usa unha solución orgánica para a liña de base B, podes colocar o tampón no tubo e na cabeza da bomba.
09. Levanta a botella e baleira a última gota
Hai unha boa probabilidade de que non teñas suficiente fase móbil para completar toda a carreira e a túa mostra fume. Ademais da posibilidade de queimar o sistema de bomba e a columna, a fase móbil evaporarase completamente e cambiará a fase móbil na parte superior da botella.
10. Use a fase móbil de desgasificación ultrasónica
O punto máis importante é asegurarse de que todas as sales tampón están disoltas, pero esta é a peor forma de desgasificar e quentará rapidamente a fase móbil, facendo que os compoñentes orgánicos se evaporen. Para evitar problemas innecesarios máis tarde, tómase cinco minutos para filtrar o baleiro da súa fase móbil.
Hora de publicación: 27-Ago-2024